Microscopía Electrónica
Fundamentos
de Microscopia Electrónica (ME)
En SE ME trabaja con muestras de
material biológico prefijadas y cortadas con ayuda de un dispositivo de
cuchillas (ultramicrotomo). En la
actualidad existen dos tipos de ME; ME de transmisión (MET) y ME de barrido (MEB). Su alto PR permite la observación de la
ultraestructura celular en el plano (ME de transmisión) y en tres dimensiones
(ME de barrido).
El aumento del poder de resolución
está en relación directa con la disminución de la longitud de onda de la fuente
lumínica ya que la apertura numérica es un parámetro que no varía mayormente
entre un microscopio y otro.
En el caso de la microscopia óptica,
el aumento efectivo es de aproximadamente 1.200 veces, comparado con el aumento
del ME que es de cerca de 1 millón de veces.
De tal modo, el microscopio óptico se utiliza para la observación de
estructuras biológicas a nivel de tejidos, pero no para la observación y el
análisis de estructuras cuyas dimensiones se ubican a nivel intracelular de
organelos (núcleo, mitocondrias, ribosomas, aparato de Golgi, cloroplastos,
etc.). en el microscopio electrónico, la
fuente de luz es reemplazada por un haz de electrones emitidos desde la punta
de un metal que recibe grandes cantidades de energía (entre 50 kilovoltios y
1000 kilovoltios). La aceleración con
que se emiten los electrones depende de la fuente de energía, la condición de
vacío y la presencia de magnetos en el tubo, gracias a estas características,
en ME la longitud de onda del electrón es cerca de cien mil veces menor que la
longitud de onda de la luz blanca, con la cual el PR aumenta cerca de unas cien
veces.
·
long.
de onda del electrón: 0,005 nanómetros
·
long.
de onda de la luz blanca: 240–760 nanómetros.
En la MET, el haz de electrones
atraviesa la preparación y entrega al observador una imagen en el plano, la
cual puede ser fotografiada y observada en la pantalla del equipo.
En la MEB, el haz de electrones
choca con una película de oro que recubre el objeto, generando un haz de
electrones secundarios, los cuales son posteriormente retransmitidos a la
pantalla del microscopio.
Microscopio
Electrónico de Barrido
Instrumento similar a un microscopio
electrónico en la cual se utiliza un haz de electrones en lugar de la luz
visible para estudiar la superficie de una muestra.
La imagen producida es de menos
aumento que la conseguida con el microscopio pero parece mediomensional y
natural.
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